Оптимізація умов ренатурації злитого білка rhIl7-BAPmut із тілець включення Escherichia coli та його практичне застосування
Journal Title: Вісник Українського товариства генетиків і селекціонерів - Year 2019, Vol 17, Issue 1
Abstract
Мета. Метою нашої роботи була оптимізація методу ренатурації злитого білка rhIL7-BAPmut, створеного на основі рекомбінантного інтерлейкіну-7 людини (rhIL7) та бактерійної лужної фосфатази з підвищеними каталітичними властивостями (BAPmut), для його отримання у функціонально активній формі. Методи. Клітини E. coli BL21(DE3) трансформували плазмідним вектором pET24-IL7-BAPmut. Синтез білка індукували за протоколом аутоіндукції. Для ренатурації білка з бактерійних тілець включення in vitro застосовували іммобілізуючу металоафінну хроматографію (IMAX) та метод плавного розведення. Результати. Поєднання методів IMAX та плавного розведення в присутності аргініну, GSH/GSSG та іонів Mg2+ забезпечило отримання rhIL7-BAPmut в очищеній функціонально-активній формі. Біфункціональну активність rhIL7-BAPmut після ренатурації підтверджували імунохімічними методами шляхом зв’язування зі специфічними антитілами. Висновки. Було показано, що застосування rhIL7-BAPmut дозволяє значно скоротити час скринінгу імунної комбінаторної бібліотеки кДНК варіабельних генів імуноглобулінів і не потребує використання специфічних первинних і вторинних антитіл. Злитий білок rhIL7-BAPmut може також використовуватись для якісного та кількісного аналізу рецепторів IL-7.
Authors and Affiliations
M. O. Usenko, O. V. Okunev, K. I. Bentsionova, O. B. Gorbatiuk, D. M. Irodov, M. V. Koval’chuk, V. A. Kordium
Keywords
Related Articles
- EP ID EP660050
- DOI 10.7124/visnyk.utgis.17.1.1199
- Views 267
- Downloads 0
Влияние репаративного энзима MGMT и сопутствующего ему белка MARP на цитотоксическое действие алкилирующих соединений в культурах клеток человека
Цель. Сравнение влияния алкилирующих соединений различного состава на выживаемость клеток человека, содержащих только белок MARP или одновременно белки MGMT и MARP. Методы. В работе использовали линии клеток Hep-2 (рак г...
«Чарівна паличка» біології – дар ченця з Брно. До 150-річчя публікації роботи Г. Менделя «Досліди над рослинними гібридами»
Представлено біографічні дані засновника сучасної генетики Грегора Менделя, проаналізовано роль його статті «Досліди над рослинними гібридами», як наукової праці, що стала одним із ключових факторів, які перетворили біол...
Довготривала відеомікроскопія живих клітин in vitro: Можливості та перспективи
Мета. Прижиттєва відеомікроскопiя клітин є високоінформативним підходом у вивченні клітинних культур. Нерідко цей метод дозволяє уточнити і доповнити дані, отримані дослідниками при візуальному вивченні живих культур або...
Геннадій Дмитрович Бердишев (07.11.1930-14.02.2016)
Василь Степанович Мамалига (до 75-річчя від дня народження)