Optimization of the fusion protein rhIL7-BAPmut renaturation process from the Escherichia coli inclusion bodies and its practical application
Journal Title: Вісник Українського товариства генетиків і селекціонерів - Year 2019, Vol 17, Issue 1
Abstract
Aim. The aim of our work was to optimize the renaturation method of the rhIL7-BAPmut fusion protein based on recombinant human interleukin-7 (rhIL7) and bacterial alkaline phosphatase with enhanced catalytic properties (BAPmut) for its obtaining in functionally active form. Methods. The cells of E. coli strain BL21(DE3) were transformed with pET24-IL7-BAPmut plasmid vector. Protein synthesis was induced by autoinduction protocol. Immobilized-metal affinity chromatography (IMAС) and slow dilution methods were applied for rhIL7-BAPmut fusion protein renaturation from bacterial inclusion bodies in vitro. Results. Combination of IMAС method and slow dilution at the presence of arginine, GSH/ GSSG and Mg2+ ions provided obtaining of rhIL7-BAPmut in pure and active form. Bifunctional activity of rhIL7-BAPmut after refolding is confirmed immunochemically by binding with specific antibodies. Conclusions. It was shown that application of rhIL7-BAPmut allows to reduce the time of the screening of immune combinatory libraries of variable genes of IgG and does not require specific primary and secondary antibodies. The rhIL7-BAPmut fusion protein also can be used for qualitative and quantitative analysis of IL-7 receptors.
Authors and Affiliations
M. O. Usenko, O. V. Okunev, K. I. Bentsionova, O. B. Gorbatiuk, D. M. Irodov, M. V. Koval’chuk, V. A. Kordium
Keywords
Related Articles
- EP ID EP660051
- DOI 10.7124/visnyk.utgis.17.1.1199
- Views 102
- Downloads 0
Evaluation of the influence of bacterial lipopolysaccharides on the resistance of Arabidopsis thaliana to phytopathogenic bacteria
Aim. To study the effect of lipopolysaccharides derived from various strains of Pseudomonas aeruginosa on resistance of Arabidopsis thaliana to phytopathogenic bacteria. Methods. Conventional methods of plant pathology w...
Ідентифікація аллелів самонесумісності у сортів черешні (Prunus avium L.) української селекції
Мета. Українськими селекціонерами створено велику кількість сортів черешні, які все ще за лишаються майже недослідженими на молекулярно-генетичному рівні. Метою роботи було провести ідентифікацію алелів самонесумісності...
Професор С. В. Клименко — видатний український селекціонер плодових рослин (до 80-річчя від дня народження)
Висвітлено основні віхи життєвого шляху і найголовніші наукові здобутки та досягнення у селекційній і науково-педагогічній роботі члена Українського товариства генетиків і селекціонерів ім. М. І. Вавилова Світлани Валент...
Дослідження прояву трансгенів після Agrobacterium-опосередкованої трансформації in planta пшениці Triticum aestivum L.
Мета. Виявлення послідовностей цільових трансгенів nptII і bar у геномі ймовірних трансформантів пшениці м’якої озимої Triticum aestivum L. сортів Зимоярка та Подолянка, отриманих в результаті Agrobacterium-опосередкован...
The role of jasmonate signaling pathway in plant’s flowering genes response to ionizing radiation
Aim. This study aimed to characterize the role of the jasmonate signaling pathway in flowering genes response to acute and chronic ionizing irradiation in plants. Methods. We used the wild-type Arabidopsis thaliana and j...