Renaturacja in vitro białek zakumulowanych w ciałach inkluzyjnych
Journal Title: Advances in Hygiene and Experimental Medicine - Year 2012, Vol 66, Issue 0
Abstract
Rekombinowane białka i enzymy dzięki ich heterologicznej ekspresji w prokariotycznych systemach ekspresyjnych są powszechnie wykorzystywane w diagnostyce, medycynie i przemyśle. Wysoki poziom ekspresji obcych białek w komórkach bakteryjnych prowadzi jednak do tworzenia nieaktywnych i nierozpuszczalnych agregatów – ciał inkluzyjnych. Przywracanie zagregowanym białkom aktywności biologicznej jest procesem skomplikowanym i czasochłonnym. Każde reaktywowane białko wymaga eksperymentalnego ustalenia optymalnych warunków. Wybór procedury i czas jej trwania zależą od rodzaju rekombinowanego białka, jego właściwości oraz czystości ciał inkluzyjnych. Do reaktywacji białek zakumulowanym w ciałach inkluzyjnych niezbędne są 4 etapy: 1) izolacja ciał inkluzyjnych, 2) rozpuszczenie agregatów, 3) renaturacja i 4) oczyszczanie aktywnych katalitycznie cząsteczek. Wydajność procesu renaturacji zależy od wielu czynników: fizycznych, chemicznych i biologicznych. Parametry te determinują szybkość procesu, zapobiegają agregacji, wpływają na rozpuszczalność i ułatwiają fałdowanie łańcuchów peptydowych oraz stabilizację fałdowanych cząsteczek. Do najpowszechniej stosowanych metod renaturacji białek należą: rozcieńczenie, dializa oraz metody chromatograficzne.
Authors and Affiliations
Dorota Porowińska, Ewelina Marszałek, Paulina Wardęcka, Michał Komoszyński
Keywords
Related Articles
- EP ID EP66700
- DOI -
- Views 144
- Downloads 0
Wpływ polimorfizmów wybranych genów cytokin na występowanie ostrego i przewlekłego odrzucania oraz na przeżycie przeszczepionej nerki
Jednym z czynników decydujących o odległych wynikach przeszczepienia nerki jest genetycznie uwarunkowane nasilenie wytwarzania mediatorów odpowiedzi immunologicznej. Spośród poznanych polimorfizmów genów cytokin, moduluj...
Iron metabolism and maternal-fetal iron circulation
Iron is an essential micronutrient for the proper functioning of most organisms. This element is used in oxygen transport, myelin and neurotransmitters synthesis, cell cycle and synthesis of nucleic acids. The importance...
Mieszki włosowe nowym źródłem komórek macierzystych
Inżynieria tkankowa jako prężnie rozwijająca się dziedzina nauki stwarza nadzieję na zastosowanie jej produktów w praktyce lekarskiej. Jednym z komponentów substytutów tkanek są różne typy komórek, zwłaszcza komórki mac...
Genetyka zespołów otępiennych. Część 2: Biologia choroby Alzheimera
Mózgi chorych z chorobą Alzheimera (AD) cechuje atrofia kory mózgowej połączona ze skurczeniem się jej zakrętów, rozszerzeniem bruzd oraz powiększeniem komór. Hipokamp i kora endorinalna są zazwyczaj pierwszymi uszkodzon...
Od tyrozyny do melaniny: ścieżki sygnalizacyjne i czynniki regulujące melanogenezę
Melaniny to naturalne pigmenty skóry, włosów i oczu. Można wśród nich wyróżnić brązowo-czarną eumelaninę i żółto-czerwoną feomelaninę. Biosynteza melanin odbywa się w melanosomach, które są wyspecjalizowanymi cytoplazmat...