Soğuk şok ekspresyon sistemi kaynaklı intein tabanlı katyonik antimikrobiyal peptitin tuz tarafından uyarılan E. coli GJ1158’den maliyet etkin şekilde saflaştırılması
Journal Title: Journal of Microbiology and Infectious Diseases - Year 2014, Vol 4, Issue 1
Abstract
Amaç: Sentetik katyonik antimikrobiyal peptid (SK-AMP) önemi gittikçe artan ve konvansiyonel antibiyotiklere alternatif olması beklenen terapötik bir moleküldür. Bu çalışmada SK-AMP’yi intein tabanlı bir sistem ile enzimatik parçalanma olmaksızın saflaştırmak amaçlanmıştır. Yöntemler: İntein sekansı pTYB11 vektöründen PZR kullanılarak amplifiye edildi ve inteinin N-terminal ucu SK-AMP ile bağlandı. Oluşturulan bu yapı soğuk şok ekspresyon vektörü MCS bölgesine klonlandı. pCOLDI ve rekombinan peptid kitin afinite kodonundan 50 mM DDT ile ayrılarak enzimatik ayrıştırma olmaksızın toplandı. Daha sonra toplanan peptitin miktarı belirlendi ve saflaştırılan pepitd yapının antimikrobiyal aktivitesi difüzyon yöntemi ile belirlendi. Bulgular: Başlangıçta intein bağlı SK-AMP, IPTG indüklenebilir E. coli BL21(DE3) ve tuz indüklenebilir E. coli GJ1158’de bir füzyon protein olarak eksprese edildi. Tuz ile indüklenen E. coli GJ1158’de kitin bağlayan kodonun kullanıldığı tek basamaklı saflaştırma ile 208 mg/L konsantrasyonunda çözünebilir SK-AMP elde edildi. Saflaştırılmış SK-AMP’nin antibakteriyel etkisi hem gram pozitif hem de gram negatif bakterilere karşı gösterildi ve minimum inhibitör konsantrasyonu belirlendi. Sonuçlar: İlk kez çözünebilir SK-AMP tuz ile indüklenebilir E. coli GJ1158’den kitin bağlayan kodon kullanılarak tek basamakta enzimatik ayrışma olmaksızın elde edildi. Anahtar kelimeler: Sentetik katyonik antimikrobiyal peptid, intein sekansı, pCOLDI, kitin bağlayan kodon, E. coli BL21(DE3) ve E. coliGJ1158
Authors and Affiliations
K Seetha Ram, M Mary Kumari, S. Divya Sri, N Bhargava Ramudu, JB Peravali, KK Pulicherla
Keywords
Related Articles
- EP ID EP131411
- DOI 10.5799/ahinjs.02.2014.01.0117
- Views 134
- Downloads 0
Hepatit C tedavisinde karşılaşılan telaprevir ilişkili DRESS sendromu
Kronik hepatit C tedavisinde telaprevir yüksek kalıcı viral yanıt ve kısa süreli tedavi özelliğiyle dikkat çekmektedir, ancak özellikle çeşitli cilt yan etkileri olmak üzere yeni yan etkilerle ilişkilidir. Biz telaprevir...
Factors Associated with Treatment Failure among Smear Positive TB Patients in Khorasan-e-Razavi and Sistan-Baluchistan Provinces, Iran
Introduction: Tuberculosis (TB) treatment failure is one of the major problems of the health sector in developing countries. Poor treatment of patients leads to drug resistance, relapse, death, and ultimately prevents TB...
A Rare Cause of Gastrointestinal Bleeding: Crimean-Congo Haemorrhagic Fever Disease
Crimean-Congo Haemorrhagic Fever (CCHF) disease is a viral haemorrhagic fever syndrome present in Turkey since 2002 [1]. CCHF is transmitted by ticks and can be fatal. Thrombocytopenia and coagulopathy...
Vankomisin dirençli enterokok’larda (VRE) vanA ve vanB gen prevalansının Taq Man real time PCR assay ile araştırılması
Amaç: Enterokoklar önemli hastane enfeksiyonu etkenidirler ve antimikrobiyal direnç potansiyelleri nedeniyle rezistans genlerinin yayılmasında önemli rolleri bulunmaktadır. Günümüzde bu mikroorganizmalar önemli bir halk...
Van yöresinde gıda çalışanlarında Helicobacter pylori dışkı antijen feko-prevelansı
Amaç: Helicobacter pylori peptik ülser ve kanserin patogenezinde rol almakta, ayrıca ekstragastrik infeksiyonlara neden olabilmektedir. Bu bakteri infekte insanlar vasıtasıyla fekal-oral, oral-oral ve gastro-oral yolla b...