Zastosowanie analizy ‘multiplex PCR’ do identyfikacji męsko-sterylnej cytoplazmy typu ogura oraz genu restorera Rfo w materiałach hodowlanych rzepaku
Journal Title: Rośliny Oleiste - Oilseed Crops - Year 2010, Vol 31, Issue 2
Abstract
Ze względu na opracowanie dla rzepaku systemów męskiej sterylności pozwalających na kontrolę zapylenia krzyżowego wzrasta zainteresowanie hodowców odmianami mieszańcowymi tej rośliny. W Krajowym Rejestrze COBORU wpisanych jest 111 odmian rzepaku, w tym 87 odmian ozimych, z których 35 stanowią odmiany mieszańcowe. Mieszańce zrestorowane F1 oraz linie restorerów nie różnią się fenotypowo od odmian podwójnie ulepszonych, dlatego w celu monitorowania obecności męsko-sterylnej cytoplazmy (CMS) typu ogura oraz genu restorera Rfo stosowano niezależnie dwa markery genetyczne, specyficzne dla CMS ogura (marker SCAR, około 500 par zasad) i genu Rfo (marker SCAR, 1 100 pz). W celu zwiększenia efektywności i obniżenia kosztów prowadzonych analiz zaadaptowano podejście w oparciu o metodę multiplex PCR, polegającą na jednoczesnej analizie obu markerów SCAR zamplifikowanych w jednej PCR. Dodatkowo, włączono kontrolę wewnętrzną polegającą na amplifikacji metodą PCR zachowawczego fragmentu cDNA aktyny (marker SCAR, 600 pz), stanowiącej białko powszechnie występujące w strukturach komórkowych. Dzięki temu wyeliminowano fałszywe wyniki negatywne, spowodowane degradacją analizowanego DNA, złą jakością odczynników lub błędem podczas wykonywania reakcji. Przy użyciu metody multiplex PCR przeanalizowano 208 prób DNA uzyskanych z mieszańców F1, linii restorerów oraz form hodowlanych rekombinantów. Równolegle prowadzono badania z zastosowaniem dwóch markerów w niezależnych reakcjach, co potwierdziło skuteczność metody. Znajdzie ona szerokie zastosowanie do rutynowych analiz w hodowli mieszańcowej i rekombinacyjnej.
Authors and Affiliations
Katarzyna Mikołajczyk, Agnieszka Dobrzycka, Jan Podkowiński, Wiesława Popławska, Stanisław Spasibionek, Iwona Bartkowiak-Broda
Keywords
Related Articles
- EP ID EP59605
- DOI -
- Views 123
- Downloads 0
Effect of tocopherols composition on the oxidizing changes of triacylglycerol samples of sunflower oil
The process of triacylglycerols decomposition in fat can be prevented by the choice of type and quantity of antioxidant with large antioxidant effectiveness. The vitamin-E-active compounds, including tocopherols, are mo...
Study on the inheritance of C18-fatty acids content in seed oil of winter oilseed rape mutants (Brassica napus L.)
Five lines with very different fatty acid (oleic, linoleic and linolenic) content in seed oil have been crossed in complete diallel design to investigate inheritance of C18-fatty acid composition.Two mutants M-10453 and...
The influence of the storage of selected vegetable oils on kinetics of decreasing photochemiluminescence
The kinetics of decreasing photochemiluminescence (CL) in oils from seeds of evening primrose (Oenothera paradoxa H.), borage (Borago officinalis L.), rapeseed (Brassica napus L.) and blueweed (Echium plantagineum L.) wa...
Temperature changes of oilseed rape ([i]Brassica napus[/i]) leaves infected by fungi of [i]Alternaria[/i] sp.
Thermographic examination enables to evaluate nondestructively the changes of radiation temperature on the surface of various objects. The aim of this study was to assess the influence of a biotic stress caused by the sp...
Wstępne badania nad resyntezą rzepaku ozimego (Brassica napus L.) Preliminary study on resynthesis of winter oilseed rape (Brassica napus
Jedną z najczęściej wykorzystywanych metod resyntezy rzepaku jest krzyżowanie wybranych podgatunków Brassica rapa L. i Brassica oleracea L.oraz uzyskanie roślin poprzez kultury in vitro izolowanych zarodków we wczesnym...